植物DNA的粗提取与鉴定
实验摘要:对香蕉的果肉组织进行DNA的粗提取,并用二苯胺﹝沸水浴﹞进行DNA鉴定。
实验原理:1.洗涤剂可溶解植物细胞膜
2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线呈U字形。
3.细胞中的某些蛋白质溶于酒精,而DNA不溶。
4. DNA分子在低温下更易凝结。
5.在沸水条件下,DNA遇二苯胺会被染成染色。
6.离心机可使悬浊液中的颗粒沉淀下来﹝详见附录﹞ 实验器材:
玻璃棒、烧杯、滤纸、试管、试管夹、电磁炉、离心机、NaCl、二苯胺试剂、洗涤剂、香蕉等
实验步骤:
1. 取50克左右的去皮香蕉,放入研磨钵中研磨,同时加入一定量的氯化
钠与洗涤剂,尽可能的充分研磨,使更多的DNA从植物细胞中释放出来,但动作要轻缓,否则会产生大量泡沫,不利于后续操作。
研磨好后,过滤并收集研磨液,在研磨液中加入氯化钠,使氯化钠溶液物质的量浓度为2mol/L,过滤除去不可溶杂质。再调节氯化钠溶液物质的量浓度为0.14mol/L,析出DNA,过滤除去溶液中的杂质,再用物质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液溶解DNA。
加入与DNA溶液体积相等的、冷却的酒精溶液﹝体积分数为百分之九十五﹞,静置2到3分钟,溶液会出现白色丝状物,这就是粗提取的DNA,用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物﹝玻璃棒带负电,易吸附DNA﹞,并用滤纸吸去上面水分,注意搅拌动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
取两支20ml试管,各加入物质量浓度为2mol/L的氯化钠溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后,将两支试管放入沸水中加热5分钟,待两支试管冷却后,比较试管颜色的变化,看看溶有DNA的溶液是否变蓝。 2. 3. 4.
实验过程摘要:
1. 在研磨时发现,用研磨钵难以将香蕉研磨充分,估计是水分较多导致的。后用榨汁机进行该部分实验,效果好很多,没有较大的固体。并意外的发现剧烈的搅拌并没有产生大量泡沫。
…… …… 余下全文