实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定

（一）实验目的要求

1. 制备芦丁，供药用。

2. 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。

3. 熟悉重结晶技巧。

4. 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。

（二）实验的基本原理

1.  芦丁的提取原理

利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。

2. 芦丁的分离原理

利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。

3. 芦丁的鉴定原理

（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。

（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。

(三) 实验内容

1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。

2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。

3. 溶剂重结晶精制芦丁。

4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁

(四) 实验药材仪器与试剂

1. 实验药材 槐米20g。

2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。

3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。

（五）实验步骤

1.提取（水提取法）

称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。

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槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）

一、 实验目的

1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。

二、实验原理

芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.

槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。

本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

三、药品材料

槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸

四、实验操作

芦丁的的提取和精制

芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9），

并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。

五、实验说明及注意事项

1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9，不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。

2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。

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实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

一、概述

槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。

药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。

主要化学成分的结构及理化性质：

芦丁（rutin）：C₂₇H₃₀O₁₆·3H₂O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

槲皮素（quercetin）：C₁₅H₁₀O₇·2H₂O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

二、实验部分

（一）实验目的

1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。

2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。

3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。

（二）实验原理

1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。

2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。

3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。

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  槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定

一、实验目的

1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。

2．掌握重结晶及过滤等基本操作。

3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。

    二、实验原理

芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下：   

芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C₂₇H₃₆O₁₆· 3 H₂O）， 熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。

芦丁在不同溶剂中的溶液度：

芦丁的紫外吸收波长（CH₃OH溶液）：λ_max = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。

槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。

槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C₁₅H₁₀O₇·2 H₂O），熔点313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下：

槲皮素的紫外吸收波长（CH ₃OH溶液）： λ _max = 259nm，266nm，299nm ，359nm。

三、实验步骤

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一、选题依据

1、论文题目及研究领域

（1）论文题目：从槐米中提取芦丁

（2）研究领域：芦丁提取工艺的方法

2、论文研究的理论意义和应用价值：

槐米系豆科sophora属植物，槐花为豆科落叶乔木槐树的花朵或花蕾，又名槐米、槐蕊等。夏季开花，当花初开放时采收花朵，称“槐花”。花未开时采收的花蕾，叫做“槐米”。（本实验用槐米）槐树喜生于山坡、平原，常栽干庭院中。历来作为止血药，治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血，并有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的作用 。其药理作用：能保持毛细血管正常的抵抗力，降低血管通透性，具有抗炎、解痉、抗溃疡、降压、抗病原微生物的作用[1] ，也可作为防治高血压及动脉硬化的辅助治疗药 。槐米的主要成分芦丁含量高达12％ ～20％

[2] 。

芦丁,槐米中特有的有效成分,具有增强血管壁的弹性、韧度和致密性的功用，可以作为毛细血管脆性引起的出血症及高血压的辅助治疗药物；同时还具有降血糖、尿糖、血脂等药理作用。通过临床观察发现，一些糖尿病患者使用槐花后，血糖和尿糖均有不同程度的下降[3-4]。鉴于芦丁对糖尿病、心脑血管等疾病所具有的特殊疗效，芦丁成分的有效利用正成为越来越多学者和科研人员研究和探索的方向。因此，芦丁被广泛用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发价值。

3、目前研究的概况和发展趋势:

3.1 槐树组织培养的研究现状

查阅大量的文献后，发现关于槐树的组织培养几乎少见，只有陕西师范大学生物系的王吉鑫之老师等做了一些研究工作，他们主要做的工作有:植物激素对槐树愈伤组织产生及分化的影响;他们用槐树胚轴、子叶及叶片外植体在MS附加2,4-D 0.1一 5mg/L,6-BA 0.1 一5mg/L的培养基上形成的愈伤组织，在含有较高比值6-BA/2.4 -D的培养基上进一步产生不定芽及芽丛，研究形成的诱导率。

他们还研究了植物激素对槐树玻璃化愈伤组织及芽发育的影响;槐树玻璃化苗与正常苗生理特性差异的研究。他们研究了槐树花药愈伤组织的诱导，器官分化及植株再生以及愈伤组织、再生植株中染色体数目的观察。但是对于槐米的愈伤组织产生时的次生代谢物却无人研究;不同浓度的激素对次生代谢物含量的影响;不同光、温度等条件对次生代谢物含量的影响及以不同部位原体愈伤组织的诱导，它们之间次生代谢物含量的比较等等工作都未见报道。

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实验一 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别

一、实验目的

（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。

（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。

二、实验原理

芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。

槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。

芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下：

水：1:10000(冷)，1:200(热)

甲醇：1:100(冷)，1:9(热)

乙醇：1:300(冷)，1:30(热)

吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)

不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。

芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。

三、实验内容

（一） 芦丁(芸香苷)的提取

1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于 1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至 pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤

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槐米中芦丁的提取与分离（欢迎转载）

一、题目：槐米中芦丁的提取与分离

二、作者：

三、摘要：从槐米中提取芦丁的实验研究。芦丁亦称芸香甙,是由槲皮素C3位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖甙，产品为黄绿色或淡黄色针状晶。芦丁在沸水中溶解度相当大（1:200），所以本实验采用水提法提取。芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离，用乙醇作洗脱剂回流。

关键词：槐米；芦丁;水提法；色谱；乙醇

四、引言：随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管疾病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首。因此对治疗和预防心脑血管疾病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要。黄酮类化合在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。芦丁存在于槐花米和荞麦叶中,槐花米中芦丁含量高达12 %～16 %。,芦丁有维生素P类药物的作用,能调节毛细血管的渗透性,保持和恢复血管的正常弹性,临床上主要用于治疗高血压及毛细血管出血。此外，对放射性伤害所以起的出血也有一定的治疗作用。

芦丁分子式: C27H30 O16;相对分子质量: 610. 52，为淡黄色粉末或极细的淡黄色针状结晶,无臭无味;可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸、乙酸乙酯中,而不溶于苯、乙醚、石油醚中;易溶于甲醇,微溶于水。芦丁的溶解度在冷水中为1 g /1 000mL;沸水中达1 g/200 mL;沸乙醇中为1 g/60 mL;沸甲醇中1 g /7mL。熔点: 176~ 178℃。

五、实验部分

1、仪器与试剂

紫外灯，蒸馏装置一套，500mL烧瓶（2只），100mL三角瓶（6只） 色谱柱：（Φ1.5*30cm）玻璃板（Φ2.5*7.5cm 6片）

硅胶G；层析用聚酰胺（60~100目）；甲醇；70%工业乙醇；槐米；芦丁标准样

2、实验步骤

1）芦丁的提取：将粉碎好的槐米14g倒入500ml烧杯中，加沸水150ml，煮沸1（在煮的过程中，可补加水），趁热用纱布过滤（2层），残渣中加入100ml水，再煮沸30min，共进行两次，将两次滤液

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