篇一 :醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

前言

血清蛋白:

血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时,脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ,脂肪酸被血清蛋白获取,并被运送到需要的部位。

牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别,它不是一定的,是多聚物,有的地方测的70 000,这就是一个数据了。在做PCR的时候会用到它。

牛血清蛋白是血液的主要成分,分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

醋酸纤维薄膜电泳:

醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。

应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋 白,甲胎蛋白,类固醇激素及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。

特点:

1.(1)醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了测定的精确性。

(2)快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45—60min即可,加上染色,脱色,整个电泳完成仅需90min左右。

(3)灵敏度高,样品用量少。 血清蛋白仅需2μl血清,甚至加样体积少至0.1μl,仅含5μg蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点,检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。

…… …… 余下全文

篇二 :实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

生化实验报告 山东大学实验报告 20xx年

3月27日

姓名 张行润 系年级 2009级生科4班 学号 200900140177 同组者 于潜 科目 生物化学实验 题目 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 仪器编号 一、 实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、 实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白

质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液

中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白

质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净

电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各

种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形

状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的

等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电

离成负离子,在电场中向阳极移动。

实验三醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

1

生化实验报告

实验三醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

在一定范围内,蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。

三、 实验器材

1、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm) 2、人血清;

3、烧杯及培养皿 数只; 4、点样器; 5、竹镊子; 6、玻璃棒;

2

7、电吹风; 8、试管 六只; 9、恒温水浴锅; 10、电泳槽;

…… …… 余下全文

篇三 :实验十:血清醋酸纤维薄膜电泳 实验报告

实验十:血清醋酸纤维薄膜电泳

【实验名称】 :血清醋酸纤维薄膜电泳

09救援一班 第3大组

室温:25°

(一)实验目的:

1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。

2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。

3.熟悉血清蛋白组分定量方法,并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。

(二)实验原理:

血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0~7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中,血清蛋白全部带负电荷,在直流电场中向正电极移动,移动的速度与带电蛋白质颗粒所带电荷成正比,与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同一条线上,电泳相同的时间,不同的蛋白质颗粒移动的距离不同,通过染色,薄膜条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明,可以进行扫描,或将色带剪下,将颜色洗脱,进行比色,都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百分比,并可计算血清中清蛋白/球蛋白比值,正常值为1.5~2.5。

(三)实验材料与仪器:

1.实验仪器材料:1、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm)2、人血清;3、烧杯及培养皿 数只;4、x光片;5、镊子;6、试管 六只;7、电泳槽;8、直流稳压电泳仪;9、7220型分光光度计;10、剪刀

2.实验试剂:1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液:取两个大烧杯,分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中;2、染色液,可反复使用;3、漂洗液:取乙醇45ml,冰醋酸10ml,混匀;4、浸出液:0.4mol/L NaOH溶液;

(四) 实验步骤:

1、准备和点样

取一条醋酸纤维薄膜,侵入缓冲液中,完全侵泡后,用镊子轻轻取出,将薄膜无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。

用X光片蘸取少量血清,然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触,样品即成一条线突于纤维膜上。待血清透入膜内,将薄膜放在电泳槽上。

…… …… 余下全文

篇四 :影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素

影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:

【1】电泳介质pH的影响:

对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的pH影响蛋白质的电泳情况 即可决定蛋白质的带电量(Q)。

pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;

pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;

pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。

pH偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。

所以,当┃pI-pH┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。

【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在pH 4~6 之间,因此,分离血清

蛋白常用pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷(Tris)

缓冲液。

【2】缓冲溶液的离子强度:

离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;

离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。

离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持pH的恒定;

离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。

所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适

的离子强度。

【对应注意点】离子强度的选择要合适,一般常用的离子强速为0.02~0.2之间。

【3】电场强度的影响:

电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度一每厘米的电势差计算,也称 电势梯度。电场强度越高,则带电离子的移动速度越快。随着电场强度的 增高,电流强度增加,产热也增多。

产热的不良后果:①引起水的蒸发,改变溶液pH及离子强度

②引起介质温度高,可使蛋白质变性。

另外,当电场强度过高时,电泳速度也会很快,分离区带将不清晰。

【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内,进行高压电泳时,必须装备有

效的冷却装置。

【4】电渗:

…… …… 余下全文

篇五 :生物化学实验五——醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 山东大学实验报告

实验五 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

13生物基地 201300140059 刘洋 20##-04-29

同组者:张奕

一、实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。

在一定范围内,蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。

三、实验器材


1.醋酸纤维薄膜(2cm*8cm)

2.人血清;

3.烧杯及培养皿数只;

4.点样器;

5.镊子;

6.玻璃棒;

7.电吹风;

8.恒温水浴锅;

9.电泳槽;

10.直流稳压电泳仪;

11.剪刀


四、实验试剂

1.巴比妥-巴比妥钠缓冲液

2.染色液(可重复使用,使用后回收)

3.漂洗液(100ml每组):95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,水50ml

4.透明液(20ml每组):无水乙醇14ml,冰醋酸6ml

…… …… 余下全文

篇六 :实验五 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白

姓名郭沈杰年级专业2012级生物科学同组者蔡萍萍

学号:12050011012

实验五醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白

   

一、实验目的

掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质。当PH>PI时,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动;当PH<PI时,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离集团不同,在同一PH值时,因所带电荷不同,而在电场中的移动速度也不相同,故可用电泳法将其分离。

       本试验以牛血清为材料,醋酸纤维薄膜为支持物,通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱,再进行观察和定量分析。

       血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。其等电点低于pH7.0,在缓冲液中(pH8.6)中,电离成负离子,在电场中向阳极移动。

三、实验仪器

1、  牛血清

       2、  醋酸纤维薄膜

       3、  镊子

       4、  电泳仪

       5、  电泳槽

       6、  盖玻片

四、实验试剂

1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液(离子强度,PH8.6):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。

…… …… 余下全文

篇七 :醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质(山东大学)

Xxxx

20110014xxxx

生科三班

同组者:xxx

一、 实验目的:

掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、 实验原理:

蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带静电荷不同,因此在电场中移动速度不同,故可利用电泳法奖它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白,β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同(见表1),在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0,所以在缓冲液(pH8.6)中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。

表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量

蛋白质名称

白蛋白

α1-球蛋白

α2-球蛋白

β-球蛋白

γ-球蛋白

三、 实验器材:

醋酸纤维薄膜(2㎝×8㎝,厚度120μm)、人血清(新鲜、无溶血现象)、培养皿Φ10㎝(×5)、点样器(或玻璃片)、镊子、玻璃棒、电吹风、吸管5.0㎝(×1)、电泳槽、直流稳压电泳仪。

1

等电点(pI) 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85~7.50 相对分子质量 69000 200000 300000 90000~150000 156000~300000

四、 实验试剂:

1. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6,离子强度0.06mol/L):称取巴比妥钠

(A.R.)12.76g和巴比妥(A.R.)1.66g,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计校正后使用。

2. 染色液:氨基黑10B0.5g、甲醇(A.R.)5ml、冰乙酸(A.R.)10ml,加蒸馏水40ml,混匀即可。

…… …… 余下全文

篇八 :醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白

学号:200900140157  班级:09生科3  姓名:俞华军  时间:2011/03/27

一.实验目的

1.掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

2.掌握电泳仪的使用方法。

二.实验原理

     蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极定向移动,在pH大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中想阳极移动。血清中含有书中蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH值得溶液中,所带净电荷不同,因此在电场中的移动速度不同,故可利用电泳法将它们分离。

     血清中含有白蛋白、α—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同(见表一),在电场中迁移速度不同,由表一可知,血清中5中蛋白质的等电点大部分低于pH7.0,所以在缓冲液(pH8.6)中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。

表一 人体血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量

在一定范围内,蛋白质的含量与结合的染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L的氢氧化钠溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。

     肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使血清中蛋白含量下降,肾病时α1、α2、β—球蛋白升高,γ—球蛋白降低。肝硬化时α2、β—球蛋白降低,而α1、γ—球蛋白升高。所以,可以测定人体血清中蛋白含量的值来诊断一些疾病。

三.实验器材

    试剂: 巴比妥—巴比妥钠缓冲液、95%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、染色液

…… …… 余下全文