篇一 :脂质体制备试验

沈阳药科大学 实验十 脂质体的制备及包封率的测定 药剂学专论实验

实验十 脂质体的制备及包封率的测定

一、 实验目的

1.掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。

2.掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。

3.熟悉脂质体形成原理,作用特点。

4.了解“主动载药” 与“被动载药” 的概念。

二、 实验指导

脂质体是由磷脂与(或不)与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团,将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中,磷脂分子定向排列,其亲水基团面向两侧的水相,疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层,构成脂质体。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂,如豆磷脂、卵磷脂等;合成磷脂,如二棕榈酰磷脂酰胆碱,二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质,与磷脂混合使用,可制得稳定的脂质体,其作用是调节双分子层的流动性,减低脂质体膜的通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等,这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质,从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。

脂质体可分为三类:小单室(层)脂质体,粒径为20~50nm,经超声波处理的脂质体,绝大部分为小单室脂质体;多室(层)脂质体,粒径约为400~3500nm,显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构;大单室脂质体,粒径约为200~1000nm,用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。

脂质体的制法有多种,根据药物的性质或需要进行选择。(1)薄膜分散法:这是一种经典的制备方法,它可形成多室脂质体,经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点是操作简便,脂质体结构典型,但包封率较低。(2)注入法:有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中,在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中,蒸去乙醚,继续搅拌1~2h,即可形成脂质体。(3)逆相蒸发法:系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂,如氯仿中,再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化,然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质,如胰岛素等的脂质体制备,可提高包封率。(4)冷冻干燥法:适于在水中不稳定药物脂质体的制备。(5)熔融法:采用此法制备的 45

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篇二 :脂质体报告

生物材料读书报告

辅导老师:陈荣 学号:06057237 学生:陈方升

一.摘要

脂质体是一种定向药物载体,属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中,这种微粒具有类细胞结构,进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能,并改变被包封药物的体内分布,使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄,从而提高药物的治疗指数,减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

脂质体最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡,每层均为脂质的双分子层;囊泡中央和各层之间被水相隔开,双分子层厚度约为4纳米。后来,将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体[1]。19xx年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体。

脂质体是由磷脂、胆固醇等为膜材包合而成。这两种成分不但是形成脂质体双分子层的基础物质,而且本身也具有极为重要的生理功能。

用磷脂与胆固醇作脂质体的膜材时,必须先将类脂质溶于有机溶剂中配成溶液,然后蒸发除去有机溶剂,在器壁上形成均匀的类脂质薄膜,此薄膜是由磷脂与胆固醇混合分子相互间隔定向排列的双分子层所组成。

按性能,脂质体可分为一般脂质体(包括单室脂质体、多室脂质体和多相脂质体等)、特殊性能脂质体、热敏脂质体、PH敏感脂质体[2]、超声波敏感脂质体、光敏脂质体和磁性脂质体等。按荷电性,脂质体可分为中性脂质体、负电性脂质体、正电性脂质体。

二.脂质体的药用机制

①细胞外释药 当脂质体进入与肿瘤部位后,在一定的外部因素作用下(如与肿瘤细胞接触﹑瘤内因代谢旺盛而局部温度升高),脂质体药物释放。在此情况下,脂质体作为药物在肿瘤内的储备库。

② 表面结合脂质体的内化 蛋白质结合于细胞表面受体,在其与细胞分离之前被内化,这一过程称为受体介导的内化。通过这一过程细胞可从外界环境中摄取营养,调整细胞内蛋白成分。许多报道证实小的脂质体靶向于肿瘤细胞后通过此途径内化。

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篇三 :脂质体转染的实验原理与操作步骤大全

脂质体转染的实验原理与操作步骤大全

日期:2012-06-25 来源:互联网 作者:青岚 点击:3644次

摘要:

细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等,理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等,本文主要介绍细胞转染常用的方法 -脂质体转染的原理和操作步骤等。

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细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等,理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等,本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。

脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2,3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。

用LR进行转染时,首先需优化转染条件,应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等,对每批LR都要做:第一,先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间,DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始,按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线,再选用LR和DNA两者最佳的剂量,确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性,转染时间以不超过24小时为宜。

细胞种类:COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。

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篇四 :脂质体转染实验步骤和细胞转染技术总述

脂质体转染实验步骤

脂质体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1:1)。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高5-100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。

用LR进行转染时,首先需要优化转染条件,应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等,对每批LR都要做。先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间,DNA可从1-5ug和孵育时间6h,开始,按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线,再选用LR和DNA两者最佳的剂量,确定出转染时间。因LR对细胞有一定的毒性,转染时间以不超过24h为宜。

细胞种类:COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。

1、操作步骤(方法一):

(1):取6孔培养板,向每孔中加入2ml含(1-2) x 10^5个细胞

的培养基,37℃、18% CO2培养基40%-60%汇合时。

(2)转染液制备:在聚苯乙烯管中制备以下两液(为转染1个空细胞所用的

量)。

A液:用不含血清培养基稀释DNA使浓度为1-10ug,终量100ul。

B液:用不含血清培养基稀释LR,使终浓度为2-50ug,终量100ul。 轻轻混合A液、B液,室温中置10-15min,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染。

(3)转染准备:用2ml不含血清培养基漂洗2次,再加入1ml不含血清培养

基。

(4)转染:把A/B复合物缓缓加入培养基中,摇匀,置37℃温箱中6-24h,

吸除无血清转染液,换入正常培养基继续培养。

(5)其余处理:如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。

(6)注意:转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。

2、快速脂质体转染法操作步骤(方法二):

?????????将细胞以5 x 10^5个/孔接种于6孔板中培养24h,使其达到50%-60%

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篇五 :温州医科大20xx药剂学实验报告本

药剂学实验报告本

适用专业仅适用于药学、生物制药专业(公办平台) 实验教材及参考书:(按编著者、教材名称、出版社*、出版年月顺序填写)? 崔福德,《药剂学实验指导》,人民卫生出版社,2011

年12月第3版

二、本课程实验教学目的与要求:(约100-150个汉字) 药剂学实验是药剂学课程的重要组成部分,但作为一门课程独立考核。它是通过实验基本技能的训练,进一步培养学生严谨的科学作风,进一步巩固课堂理论知识,掌握药剂学中各种剂型的基本制备方法、影响各剂型中药物质量和稳定性的因素及考察方法、新技术新工艺在药物制剂中的应用、处方前研究的意义等,为学生将来从事制剂研究与生产提供一个实践基础

三、实验项目与主要内容: 序号 实验项目 名称 学 时 主要内容和应达到的基本要求 实 验类型 实验要求每组人数1

实验一、 液体制剂的制备

内容: 1)复方碘溶液的制备2)甲酚皂溶液的制备3)加液研磨法制备氧化锌混悬剂4)干胶法制备乳剂 5)液体石蜡乳化所需HLB值的测定

要求: 1)掌握溶液型、胶体溶液型、混悬型、乳剂型液 体制备过程的配制的特点与各项基本操作、形成原理及其中常有附加剂的正确使用

2)熟悉:混选型和乳剂型液体制剂质量评价方法

3)自带刻度尺综 合必做

4)注意事项:

?煤酚有腐蚀性和挥发性,注意劳动保护,试剂瓶及时封口。

?强调干胶法制备初乳时的比例与关键操作。

2实验二、 注射剂的制备

内容: 1)5%维生素C注射液的制备: 2)维生素C注射液稳定性的因素(PH): 要求: 1)掌握注射剂工艺过程和操作要点 2)掌握影响易氧化药物注射液稳定性的主要因素

3)熟悉注射剂成品质量检查标准和方法

注意事项:

?预习微孔滤膜的使用方法

?用NaHCO3调节PH时注意搅拌均匀,完全溶解后再测,以免影响结果及造成喷瓶。 ?注意酒精喷灯的安全使用,加强对学生的指导,做好应对意外的紧急措施。 ?酒精一定要无水酒精。

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篇六 :脂质体

脂质体

脂质体(liposome)是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中,脂质体疏水尾部伸向空气,搅动后形成双层脂分子的球形脂质体,直径25~1000nm不等。脂质体可用于转基因,或制备的药物,利用脂质体可以和细胞膜融合的特点,将药物送入细胞内部 生物学定义:当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时,分子的疏水尾部倾向于聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相,形成具有双分子层结构的的封闭囊泡,称为脂质体。 药剂学定义 脂质体 (liposome): 系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。

  脂质体(liposome)是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中,脂质体疏水尾部伸向空气,搅动后形成双层脂分子的球形脂质体,直径25~1000nm不等。脂质体可用于转基因,或制备的药物,利用脂质体可以和细胞膜融合的特点,将药物送入细胞内部 生物学定义:当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时,分子的疏水尾部倾向于聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相,形成具有双分子层结构的的封闭囊泡,称为脂质体。药剂学定义 脂质体 (liposome): 系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。

分类

  脂质体的分类

  1.脂质体按照所包含类脂质双分子层的层数不同,分为单室脂质体和多室脂质体。

  小单室脂质体(SUV):粒径约0.02~0.08um;大单室脂质体 (LUV)为单层大泡囊,粒径在0.1~lum。

  多层双分子层的泡囊称为多室脂质体 (MIV),粒径在1~5um之间。

  2.按照结构分:单室脂质体,多室脂质体,多囊脂质体

  3.按照电荷分:中性脂质体,负电荷脂质体,正电荷脂质体

  4.按照性能分:一般脂质体,特殊功效脂质体

组成与结构

  脂质体的组成与结构

  脂质体的组成:类脂质(磷脂)及附加剂。

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篇七 :包合物实验报告

姜黄素β—环糊精包合物的制备及质量检测

摘要采用饱和水溶液法,以姜黄素、β-环糊精为主要原料,制备姜黄素β—环糊精包合物,得到颗粒状、铁锈红的包合物。并利用紫外分光光度法对其进行质量评价。

关键词姜黄素β-环糊精包合物紫外分光光度法饱和水溶液法

Abstract Using curcumin, β-cyclodextrins as the main raw material to make the Inclusion Compound of Curcumin withβ-Cyclodextrin by the Saturated solution method.We getgranular and rusty Inclusion Compound.ThenUV-Vis spectrophotometerwas used to determine the quality of Inclusion Compound.

Keycurcuminβ-cyclodextrinsInclusion CompoundUV spectrophotometrySaturated solution method

姜黄素为中药姜黄的主要成分。现代药理研究表明姜黄素有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、利胆、降血脂、抑菌等多种药理作用。分子极性较小,分子量为368,能与B一环糊精形成包合物,可增加难溶性药物姜黄素的溶解度和生物利用度,可以增加药物的稳定性,掩盖药物的不良气味,降低药物的刺激性与毒副作用。

[1]

1. 材料与方法

1.1仪器和药品

DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ,郑州长城科工贸有限公司) 755B紫外可见分光光度仪(上海菁华科技仪器有限公司)电子天平(JA5003A,上海精天仪器有限公司)烧杯玻棒托盘天平布氏漏斗冰箱滴管无水乙醇(AR,重庆川东化工(集团)有限公司)姜黄素β-环糊精(BR,成都市科龙化工试剂厂)

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篇八 :设计性试验报告模板

中南大学药学院

药剂学设计性实验

----实验报告

      吲哚美辛肠溶缓释微囊的制备工艺研究 

   学生姓名 谢商宸王菲菲林秀贤李常聆高青谢婉莹

   指导教师        姚瑶老师  贺凌云老师                   

   专业班级           药学1101                  

   时    间           2014.05.26              

前言(1000字)

吲哚美辛是一种非甾体抗炎药,主要用于急性风湿性及类风湿性关节炎的治疗。此外,文献报道它对结直肠癌也有一定的治疗作用[1]。吲哚美辛属于药剂学分类系统的Ⅱ型药物,具有溶解度低、渗透性高的特点,主要的吸收部位在小肠。

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