姓名：** 年级专业：20##级生物科学

同组者：**

学号：***

实验六 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

一、实验目的

掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐。本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。若无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、实验仪器

1、新鲜水果

2、电子分析天平

3、吸管

4、容量瓶

5、滴定装置

6、锥形瓶

7、研钵

8、漏斗

四、实验试剂

1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。

2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。

3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.

4、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。每次临用时，以标准抗坏血酸液标定。

五、实验步骤

（一）样品中抗坏血酸的提取：

1、将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。

2、称取5.0g，加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。

3、称取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。

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生物化学实验报告

维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

一、实验目的

掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸。在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、实验器材

    1、松针、菜椒、大枣；

2、取液器

3、容量瓶100ml

4、微量滴定管5ml

5、电子天平

6、研钵、烧杯数只

7、漏斗 两个

四、实验试剂

   

1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；

2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；

3、标准抗坏血酸溶液；

4、1%HCl；

5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。

五、实验操作

    1、样品的提取

松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；

菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。准确称取得大枣2.0025g、菜椒1.9963g。分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；

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实验九  食品中维生素C含量的测定

1.实验目的

学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定食品材料中维生素C含量的原理和方法。

2.实验原理

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。

维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：

当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。

3.仪器及材料

3.1仪器

容量瓶、锥形瓶、微量滴定管、洗耳球

3.2试剂

（1）1%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水；

2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水。

（2）维生素C标准储备液：准确称取20mg维生素C溶于1%草酸溶液中，移入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混匀，冰箱中保存。

（3）维生素C标准使用液（0.02648mg/ml）：吸取维生素C贮备液5ml，用1%草酸溶液稀释至50ml。

标定：准确吸取上述维生素C标准使用液25.0mL于50mL锥形瓶中，加入0.5mL 60g/L碘化钾溶液，3～5滴淀粉指示剂 (10g/L)，混匀后用0.0010mol/L标准碘酸钾溶液滴定至淡蓝色（极淡蓝色）为终点。 重复操作三次，取平均值计算L-抗坏血酸的浓度。

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饮料中维生素C含量大小比较的测定

一、实验背景

维生素C的功效早已被人们广泛接受，许多食物、保健品都会贴上含有维生素C的标签。德国营养研究会建议，每人每天应摄取50~100mg的维生素C。而30mg的维生素C是人体1天摄取维生素C的最少值，如果低于30mg，身体就会缺乏维生素C，使得部分机能无法正常运作，长期以往，甚至出现坏血症。因此，本实验着手于生活中人们常常饮用的三种饮料和维生素C含片进行测定，比较这四种液体中维生素C含量的大小关系，从而得出哪种饮料适合作为我们日常补充维生素C的来源。

二、实验原理

1.淀粉遇碘变蓝色，而碘离子不能使淀粉溶液改变颜色。

2.维生素C具有很强的还原性，能将碘还原成碘离子。

三、仪器与药品

仪器：托盘天平、试管架、锥形瓶、玻璃棒、胶头滴管、烧杯、试管、量筒。

药品：碘酒、维生素C含片、美汁源果粒橙、水溶C100、农夫山泉混合果蔬、淀粉。

四、方法与步骤

（一）淀粉溶液的配制

1.用托盘天平称取5g淀粉，用烧杯量取100ml的水。

2.将5g淀粉缓缓倒入盛有100ml水的烧杯中，边加边用玻璃棒搅拌。

（二）维生素C含片的溶解

1.用量筒量取20ml水倒入烧杯中。

2.将2片维生素C片放入盛有20ml水的烧杯中，并用玻璃棒搅拌使其溶解。

（三）淀粉溶液与碘酒混合

用四支试管分别取4ml淀粉溶液，再用胶头滴管向着四支试管里各里5滴碘酒。充分摇匀后，四支试管中溶液呈蓝色。

（四）用四种饮料进行“滴定”

1.用量筒分别量取10ml的水溶C、农夫果园、果粒橙和维生素C含片溶液，并观察和记录原饮料溶液的颜色。

2.用胶头滴管向4支淀粉碘酒混合溶液中分别加水溶C、农夫果园、果粒橙和维生素C含片溶液。边加边震荡，当滴加饮料溶液正好使得淀粉碘酒混合溶液的颜色完全退去即呈现出饮料原溶液的颜色时，“滴定”完成。

3.读出并记录量筒中水溶C、农夫果园、果粒橙和维生素C含片溶液各用去的含量。

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紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量

一、实验目的

1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；

2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。

二、实验原理

维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变 ,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H⁺,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。

具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达10⁴-10⁶数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～ 6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。

三、实验仪器及试剂

实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计

实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105 ℃干燥至恒重（含量为99.7 %）、维生素C片（2片）、去离子水

四、实验步骤

1. 0.005 mol·L^-1硫酸溶液的配制

用0.5 ml移液管移取0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000 ml容量瓶，稀释至刻度，待用。

2. 0.5 g·L^-1  对照品溶液的配制

精密称取105℃ 干燥至恒重的维生素C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L^-1硫酸溶液制成0.5 g·L^-1 对照品溶液。

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昌吉学院化学与应用化学系

20##—20##学年度第二学期

分析化学设计实验

化学与应用化学系B0901班

做实验者：马国民

二零##年六月十九日

分析化学设计实验报告单

实验名称：柠檬中维生素C含量的测定

院系名称：化学与应用化学系

专业名称：化学

学生姓名：马国民

学生学号：0925814027

指导老师：魏玲老师

化学与应用化学系B0901班

20##年6月19日

分析设计试验实验内容

一、实验来源与原理

维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有1500mg维生素C，最高峰值为3000mg维生素C。当维生素C缺乏时，会患坏血病等一些疾病，严重缺乏甚至会造成死亡。人和一些高等动物与植物以及低等动物不同，不能自身合成维生素C，只能从食物中摄取。桔子含水量高，营养丰富，含大量维生素C，枸橼酸及葡萄糖等十余种营养物质。柠檬的营养丰富，在每百克柠檬果肉中，含蛋白质0.9克，脂肪0.2克，碳水化合物5.5克，灰份0.3克，钙24毫克，铁0.1毫克，钾120毫克，尼克酸0.1毫克，维生素C 11毫克以及许多人体必须的微量元素。

维生素C主要生理功能:

近代研究表明VC对人体健康至关重要： 1．胶原蛋白的合成需要维生素C参加，所以VC缺乏 食用富含维生素C的食物可防晒，胶原蛋白不能正常合成，导致细胞连接障碍。人体由细胞组成，细胞靠细胞间质把它们联系起来，细胞间质的关键成分是胶原蛋白。胶原蛋白占身体蛋白质的1/3，生成结缔组织，构成身体骨架。如骨骼、血管、韧带等，决定了皮肤的弹性，保护大脑，并且有助于人体创伤的愈合。 2．坏血病。血管壁的强度和VC有很大关系。微血管是所有血管中最细小的，管壁可能只有一个细胞的厚度，其强度、弹性是由负责连接细胞具有胶泥作用的胶原蛋白所决定。当体内VC不足，微血管容易破裂，血液流到邻近组织。这种情况在皮肤表面发生，则产生淤血、紫癍；在体内发生则引起疼痛和关节涨痛。严重情况在胃、肠道、鼻、肾脏及骨膜下面均可有出血现象，乃至死亡。 3．牙龈萎缩、出血。健康的牙床紧紧包住每一颗牙齿。牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易产生牙龈萎缩、出血。 4．预防动脉硬化。可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。 5.是一种水溶性的强有力的抗氧化剂。可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。 6．治疗贫血。使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。 7．防癌。丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。曾有人对因癌症死亡病人解剖发现病人体内的VC含量几乎为零。 8．保护细胞、解毒，保护肝脏。在人的生命活动中，保证细胞的完整性和代谢的正常进行至关重要。为此，谷胱甘肽和酶起着重要作用。谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽，在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC是一种强抗氧化剂，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。酶是生化反应的催化剂，有些酶需要有自由的巯基（-SH）才能保持活性。VC能够使双硫键（-S-S）还原为-SH，从而提高相关酶的活性，发挥抗氧化的作用。从以上可知，只要VC充足，则VC、谷胱甘肽、-SH形成有力的抗氧化组合拳，清除自由基，阻止脂类过氧化及某些化学物质的毒害作用，保护肝脏的解毒能力和细胞的正常代谢。 9．提高人体的免疫力。白细胞含有丰富的VC，当机体感染时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成，提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的增生。 10．提高机体的应急能力。人体受到异常的刺激，如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。

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 实  验  报  告

姓名：            班级：            同组人：          自评成绩：        

项目：  直接碘量法测定维生素C的含量 课程：          学号：                 

一、实验目的

1. 熟悉直接碘量法的操作步骤及注意事项。

2. 了解维生素C的测定原理及条件。

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸，其分子中的烯二醇基具有较强的还原性，能被I₂定量氧化成二酮基，所以可用直接碘量法测定其含量。反应方程式如下：

在中性或碱性条件下，维生素C易被空气中的O₂氧化而产生误差，尤其在碱性条件下，误差更大。故该滴定反应在酸性溶液中进行，以减慢副反应的速度。

注意事项：

1. I₂具有挥发性，取完后应立即盖好瓶塞。

2. 维生素C易被空气氧化而引入误差，所以不要3份同时移取。

3. 滴定近终点时应充分振摇，并放慢滴定速度。

三、仪器和药品

仪器：分析天平，酸式滴定管(25mL，棕色)，吸量管(2mL)，量筒(15mL、5mL)，碘量瓶(250mL)。

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