实验一  微生物形态观察

一、        实验目的

1．  巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；

2．  认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；

3．  练习手绘微生物图片。

二、        实验原理

1．  细菌基本形态

细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。

除此之外，还有一些特殊形态的细菌。

2．  细菌特殊结构

    细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。

3．  真菌的结构特征

    菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。

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实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数

一．实验目的

1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。

2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。

3.了解血球计数板的构造和使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法。

二、实验原理
1. 霉菌定义及用途

n  霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。

n  霉菌在自然界中广泛分布，与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一种微生物，如早期进行的酱和酱油的制作等。

n  霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。

2.霉菌特征

n  霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

n  菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

n  霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约3-10um)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。因此，用低倍镜即可观察。

3.霉菌的菌落

n 松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松，因而形成的菌落也比较疏松，呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状；

n 大：菌落形态较大，一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍，有时会长满整个培养皿；

n 干：外观干燥，不透明；

n 挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取；

n 颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。

   

同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同。但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一。

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实验六：放线菌的形态观察

     

姓名:戈奕文

学号：201005140022

系别：2010生物基地

组别：周一下午第一组

试验日期：20##年11月5日

同组成员：孟亚平 宋宁 褚鹏程

【摘要】

配制高氏I号培养基用来培养青色链霉菌和弗式链霉菌，本实验运用插片法观察放线菌的形态，初步地了解放线菌的基本结构和形态。更直观的了解，基内菌丝、气生菌丝以及气生菌丝分化而成的孢子丝以及孢子。

【关键词】

青色链霉菌（Streptomyces glaucus） 弗氏链霉菌（Streptomyces microflavus）

高氏I号培养基    插片法

【前言】

放线菌（actinomycetes）是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。广泛存在于自然界中，土壤中最多，主要以孢子繁殖，至今发现的共有五六十属，它与人类的关系极为密切，根据1978年的统计，在当时已发现的5128种抗生素中，有3165种为各种放线菌所产生，链霉菌属又占放线菌中的首位（占放线菌产生的抗生素中的87.5％）；有的放线菌还可用于生产维生素、酶制剂等；少数会引起人类、动物、植物的疾病。链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其孢子丝的形态多样，而且性状较稳定，是对它们进行分类、鉴定的重要指示。因此学习如何培养和观察它们不仅对科学研究有很大的意义，对实际生活应用也有很大的帮助。本实验采用合成培养基进行培养，采用插片法取菌观察，不仅可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的放线菌形态，除此之外还可以采用玻璃纸法、印片法进行观察。链霉菌属（Streptomyces）共约1，000多种，它们具有发育良好的菌丝体，也是实验中选取它们观察的重要原因。

一、   实验目的

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实验五 霉菌形态及菌落特征的观察

一、目的要求

1.掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。

2.掌握常用的霉菌制片方法

二、基本原理

霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。

霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。

三、器材

曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）；

乳酸石炭酸棉蓝染色液，20％甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基；无菌吸管，载玻片，盖玻片，U形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。

四、操作步骤

1．一般观察法

于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。

2．载玻片观察法

(1)将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟或干热灭菌，备用。

(2)将6—7ml灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9cm的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0．5—1cm的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块。

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实验报告内容：一、实验目的 二、实验仪器 三、实验原理 四、实验步骤 五、实验数据和数据处理 六、实验结果 七、分析讨论 八、思考题

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实验七、霉菌的培养及形态观察

09生科三班一组 郜思齐 200900140026 20##-11-10

一、  实验目的

（1）    学习并掌握霉菌形态观察法。

（2）    了解四类霉菌的基本形态。

二、  实验原理

      霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后改上载玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可防腐，乳酸可保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干燥，能防止孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。

三、  实验器材

   菌种：曲霉，毛霉，青霉，根霉。

   仪器：分析天平，玻璃棒，三角瓶，小烧杯，加热器，漏斗，纱布，培养皿，载玻片，盖玻片，U 型玻棒，解剖刀，镊子，接种环，移液管，酒精灯，显微镜等。

   试剂：马铃薯20g，蔗糖2g，琼脂2g，水100mL，20%甘油等。

四、  实验内容

（1）配制马铃薯培养基

配制200ml马铃薯培养基（PDA），其成分配比及配制方法见附录一。灭菌后无菌操作取培养基分别倒少量于灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。再将这一层培养基用解剖刀切割为若干1cm²左右的琼脂块。

（2）制作小室及接种培养

①  制作：在平皿底部铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上放一U型玻棒。在玻棒上放上一块载玻片。取方形琼脂块，将其移至载玻片上，载玻片两端各放置一块。

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“实验”实验报告单