实验一 蛋白质及氨基酸的呈色反应
一、实验目的
1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式
2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法
二、实验原理
1. 双缩脲反应(biuret reaction)
蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,呈现紫色或红色,此反应称为双缩脲反应,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)
蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。
3.苯环的黄色反应
Tyr TrpPhe+少量浓硫酸+浓硝酸 黄色
4. 乙醛酸的反应:
检测Trp或含Trp蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时,产生分层现象,界面出现紫色环。主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。
5. 偶氮反应
偶氮化合物都含有-N=N-这样结构,通常作为染料。
6. 醋酸铅反应
三、实验步骤
1. 双缩脲反应(biuret reaction)
取1支试管,加乳蛋白溶液(蛋清:水= 1:9)约1ml和10%NaOH约2ml,摇匀,再加1%CuSO4溶液2滴,随加随摇。观察现象,记录。
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