红细胞渗透脆性试验

[目的和原理]  目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。

将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。

[实验对象]  家兔

[实验器材]  试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。

[实验步骤]

（一）低渗盐溶液的配制

取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。

（二）枸椽酸钠血的制备

家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。

[观察项目]

用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。

1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。

2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。

3、试管内溶液呈现透明红色，说明红细胞全部溶解，称为完全溶血，首先引起红细胞全部溶解的低渗盐溶液浓度，即红细胞的最大抵抗力（最小脆性）。

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                        红细胞渗透脆性实验

一.原理：

本实验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系，表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）.球形细胞表面积/体积比值减少,脆性显著增加.

二.试剂:

171mmol/LNaCl溶液(10g/L):

取经100度烘干的分析纯氯化钠1.000g置100ml容量瓶中,加少量双蒸溜水溶解后,再加双蒸溜水至刻度

三.操作:

   1.分别取10g/LNaCl液和蒸溜水,按表加入小试管中

2.将试管架带至病人面前,用配备6号针头的干燥灭菌注射器取静脉血1~1.5ml,立即滴于各管中,每管1滴(贫血病人可加2滴),轻轻摇匀,室温静置.

3.每次试验均应同时作正常对照.

结果判断

静置室温2小时,观察结果,从高浓度管开始观察,上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管;溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.

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「参考值」 开始溶血：0.42%～0.46%氯化钠溶液 完全溶血：0.28%～0.32%氯化钠溶液 「临床意义」 红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜可使红细胞逐渐胀大而破坏。本试验是测定红细胞对各种浓度的低渗溶液的抵抗力。红细胞对低渗溶液抵抗力与其厚度有关，厚度越大，膜面积与体积比值越小，则渗透脆性越大。 1.红细胞脆性增加遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。 2.红细胞脆性减低见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型β海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等。

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实验七 贫血骨髓涂片检查（二）

一、 教学内容：

1. 巨幼细胞性贫血骨髓片观察。

2. 再生障碍性贫血骨髓片观察。

二、 目的与要求：

1. 初步掌握巨幼细胞性贫血的骨髓象特点。

2. 初步掌握再生障碍性贫血的骨髓象特点。

三、 器材、试剂与标本：

1. 器材与试剂：

（1） 显微镜

（2） 香柏油

（3） 擦镜液

（4） 擦镜纸

2. 标本：

已染色的巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血骨髓片

四、 检查方法：

将已染色的涂片先用低倍镜观察，选择涂片较薄，细胞分布均匀，红细胞不重叠，染色较佳的区域，在涂片上滴加一滴香柏油，转换油镜观察。

1. 再生障碍性贫血的骨髓象特点：见理论教学

2. 巨幼细胞性贫血的骨髓象特点：见理论教学

五、 拖片与擦镜：

在涂片的一端放上两张擦镜纸后滴加擦镜液，完全浸透后从另一侧拖出即可，涂片擦净后交给学习委员统一收回。另用两张擦镜纸滴加擦镜液按同一方向擦拭显微镜油镜镜头后将其放回原处。

六、 实验报告：

填写骨髓检查报告单。

实验八 红细胞渗透脆性试验

一、 教学内容：

红细胞渗透脆性试验

二、 目的与要求：

掌握红细胞渗透脆性试验的方法。

三、 原理

本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。这主要取决于红细胞表面积与其体积之比。表面积大而体积小对低渗盐水抵抗力较大(脆性较小)；反之，则脆性增加。

四、 器材、试剂：

1. 器材：试管（架）、静脉采血器材、移液管

2. 试剂：171.1mmol/L NaCl溶液、蒸馏水

五、 操作：

3. 按表配制不同浓度的NaCl溶液。

4. 静脉采血1ml，针头斜面向上，通过6号针头向以上每管加入1滴血，轻轻摇匀，

在室温静置2h后，观察结果。

5. 同时用正常人作对照组。

六、 结果观察：

先从高浓度开始观察，上层溶液开始出现透明红色者为开始溶血管，溶液为透明红色 且管底红细胞完全消失者为完全溶血管。分别记录其各自的NaCl浓度。

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1、 【预期用途】

适用于体外检测贫血等引起的红细胞渗透脆性病变，特别是红细胞渗透脆性降低一类的贫血症筛查。（如地贫症、严重缺铁性贫血症）

2、 【检验原理】

贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血。

3、 【主要组成成分】

组成

由A母液（红细胞渗透脆性检测液）；B母液（终止红细胞溶血液）；C母液（红细胞溶血液）组成；

成分

A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；B母液采用氯化钠制成；C母液采用皂素（saponin）制成。

4、 【贮存条件及有效期】

避光贮存在2℃~8℃环境中，其保质期12个月。

A和B试验液可在室温保存，C试验液在2℃~8℃保存；试剂开瓶后有效期为3个月。

5、 【适用仪器】

具有530波长的分光光度计；普通离心机；水浴箱。

6、【样品要求】

新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。

7、 【检测方法】

【试验液配制】

1、 A试验液：

用一个100ml容量瓶（不要用量筒！），上放一个小漏斗。将A母液倒入漏斗中。用纯化水洗净装A母液的管和盖，将管内余液倒入100ml容量瓶，然后加纯化水于100ml容量瓶中，准确至100ml刻度，混匀后即为A试验液。

2、 B试验液：

将B母液倒入100ml容量瓶中，加入纯化水100ml，混匀后，即为B试验液。

3、 C试验液：

将C母液倒入100ml容量瓶中，加入纯化水60ml，混匀后，即为C试验液。

【实验操作】

1、 取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。

2、 加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分钟。

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红细胞渗透脆性的测定

[目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。 正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶 液。将红细…

[目的与原理]
掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正 常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶 液。将红细胞置于等渗溶液中， 其形态和容积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力 大小与红细胞膜脆性有关。通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液 的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。刚 能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。在 刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。
[实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl，
蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。
[实验步骤]
1、 取小试管10支，编号后，按下表制成不同浓度的NaCl 溶液。

2、用润湿过抗凝剂的注射器 从鱼尾静脉采1毫升血，立即向每一试管中各加一滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观 察结果。多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。加以混合，以备重复实验使用。
3、观察结果：记录开始溶血和完全溶血的两管NaCl溶液浓度。
按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血。
（1）上清液无色，管底为混浊红色或有沉淀的红细胞，表示没有溶血。
（2）上清液呈淡红色，管底为混浊红色表示只有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶血。开始出现部分溶血的NaCl溶液浓度，即为红细胞的最小抵抗值，也是红细胞的最大脆性。
（3）管内液体完全变成透明的红色，管底无细胞沉积，为完全溶血。引起红细胞完全溶解的最低NaCl溶液浓度，即为红细胞的最大抵抗值，即红细胞的最小脆性。
[方法评估]
该方法筒单实用，但应严格控制血量（血液和NaCl溶液之比约为1:25）和防止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确度。本试验敏感性较差，需结合其他实验室检查结果进行分析。
[应用意义]
渗透脆性指标对于掌握细胞膜的特性、形态和生理功能具有一定意义，如膜的特性、流动性、结构、组成成分等的改变，均使膜的脆性发生改变。
[注意事项]
1、配制1.0%NaCl溶液，称量必须准确。
2、取血时一定要避免溶血。
3、滴加血液时要靠近液面，使血滴轻轻滴入溶液以免血滴冲击力太大，使红细胞破损而造成溶血的假象。． 4、加入血滴后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈振荡。
5、应在光线明亮处观察结果。如对完全溶血管有疑问，可用离心机离心后，取试管底部液体一滴，在显微镜下观察是否有红细胞存在。

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生理学实验设计

               

                ————分光光度法测定红细胞渗透脆性

分光光度法测定红细胞渗透脆性

红细胞膜，有人称为鬼影(ghost)，是一种由磷脂、非酰化的胆固醇和糖蛋白等组成膜脂质和主体、膜蛋白质(转运蛋白和表面抗原)与周围膜蛋白质(膜骨架中的收缩蛋白和肌动蛋白以及膜骨架依靠的锚蛋白)所组成。这些成分要保证红细胞在120天寿命内50，000次通过“急流旋涡”仍能生存；要控制Na+和K+在细胞内的浓度，任何导致K+漏出增高超过Na+的漏入，均会导致细胞内单价阳离子和水分的丢失。这些生理功能的完善与否，可用简单且明白的膜渗透脆性试验来了解。

传统的测定方法采用目测观察其溶血情况，观察需要静置几个小时且过程中不能晃动。此法仅能观察到溶血的大致情况，不能量化红细胞破裂的程度。本实验采用分光光度法精确测定红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血情况，本实验操作简单、准确可靠、时间短，能消除常规目测观察的主观误差。

【实验原理】

    正常红细胞悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞对低渗溶液有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。

【实验目的】

1、理解细胞外渗透压对维持细胞正常形态和功能的重要性。

2、掌握红细胞渗透脆性的实验原理。

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