本科学生综合性实验报告

学号： 104120281 姓名： 李胜美

学院： 生命科学学院 专业、班级：10应用生物教育B班 实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞

悬浮及体细胞胚胎发生培养实验

教师： 杨 世 忠

开 课 学 期： 2012 至 2013 学年 第二 学期 填 报 时 间： 2012 年 6 月 20 日

云南师范大学教务处编印

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植物组织培养实验报告

一 实验目的

让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。

二 实验原理

植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（ IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（ 6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。

三 实验器材

（一）试剂

乙醇、IAA 或 2 ， 4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） MS 培养基

（二）仪器设备

培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等

三 实验步骤

1. 配制培养基

（ 1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。

（ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中按表 33 – 1 加入 IAA 和 6–BA 。

吲哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。

2. 培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中，每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，

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注:请用A4纸书写，不够另附纸。                                                           第　　　页，共　　　页

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植物组织培养实验报告

实验一  母液的配置与保存

一 、实验目的

通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法

二 、实验原理

     配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。

三 、实验材料、试剂和仪器设备

1.试剂

NH₄NO₃ ,KNO₃ ,KH₂PO_{4 ,}CaCl₂·2H₂O ,MgSO₄·7H₂O,FeSO₄·7H₂O

Na_2-EDTA,MnSO₄·4H₂O,ZnSO₄·7H₂O,H₃BO_3,KI,Na₂MoO₄·2H₂O

CuSO₄·5H₂O,CoCl₂·6H₂O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，

烟酸，蒸馏水

2.仪器设备

电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。

四、 实验步骤

1 大量元素母液的配制

先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH₄NO₃ ,KNO₃ , KH₂PO_{4 ,} MgSO₄·7H₂O, CaCl₂·2H₂O，待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

2 微量元素母液的配制

按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO₄·4H₂O, ZnSO₄·7H₂O

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植物组织 培养

实验报告

学院：生命科学技术学院

班级：11生物技术(制品)

学号：   2011192017   

姓名：     李鹏      

植物组织培养实验报告

实验一植物组织培养母液的配制

一 、实验目的

1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。

2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。

二 、实验原理

培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。

无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。

有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB₁、B₆、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。

常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA₃）。

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月季植物组织培养实验报告

姓名：张恒玉

（天津师范大学 10生乙 10517085）

摘要：月季（Floribunda roses）为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪， 栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。

植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象，把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选，使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。

关键词： 月季    组织    培养

RosePlant Tissue Culture Lab Report

Name: ZhangHengyu

（Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences 300387）

Abstract:Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae  Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors available, easy to trim the tree, planting small difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications  in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant  improvement   potential   applications.

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植物组织培养实验报告

姓名： 覃丽静

学号： 20100203310026 学院： 园艺园林学院 年级： 10级 专业： 园艺（花卉与景观设计方向）任课老师： 朱靖杰

班1

外植体表面消毒和接种简介

培养材料的灭菌与接种是组织培养过程中一个重要的环节。因此，在学习植物组织培养课程中我们需要领会无菌培养对实验材料消毒，接种的要求，并掌握培养材料灭菌，接种的操作技术。下面简要介绍外植体表面消毒和接种的原理，需要的器材，操作过程以及注意事项。

一． 实验原理

组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，这意味着在培养过程中，必须防止和消除细菌，真菌，藻类以及一些微生物的感染。所有培养基，培养瓶，器材和植物材料本身均需要严格消毒。无菌是所有植物培养成功的前提。

植物体内带有各种各样的微生物，一旦与培养基接触，这些微生物就会迅速繁殖，导致实验失败。对于初代培养来说，为了得到无菌的材料，材料的选择，消毒灭菌和接种都十分重要。

对材料表面消毒，所用消毒剂种类、浓度和处理时间，要根据材料带菌情况、材料对消毒剂的敏感程度及消毒效果、材料类型及老嫩程度，通过实验优化。

外集体表面消毒的步骤一般可概括为：流水冲洗一个小时左右，70％酒精浸泡数秒或更长时间。0.1％~0.2％HgCl2浸泡5~15min（或2％~10％NaClO浸泡10~30min），无菌水泥冲洗4~5次。

对于初代培养来说，及使进行表面消毒，污染仍然是难免。为了提高无菌材料培养的获得率，减少工作量，初步接种每管放一块材料而不放2块或更多，采用大量小试管将材料分散是最有效的策略。

植物组织培养接种是把经过表面消毒的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，并将它们转到无菌培养基上的全部过程。整个过程需无菌操作。

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