姓名董朔晖 系年级生命科学院2011级 学号201100230164
科目细胞生物学实验 实验题目细胞凝集反应 日期 2012.2.23
实验一:细胞凝集反应
一、实验目的
1、了解细胞的表面结构。
2、掌握细胞凝集的原理。
3、掌握细胞凝集实验的操作方法。
4、掌握普通光学显微镜的使用方法。
二、实验材料
1、实验材料
家兔(或2%家兔红细胞悬液)、土豆块茎(或由土豆块茎制作的可溶性土豆凝集素粗提取液)、PBS缓冲溶液(磷酸缓冲溶液)、柠檬酸钠溶液、0.9%的氯化钠溶液(生理盐水)
2、实验器材
5ml注射器、酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管
三、实验原理
1、在细胞表面,组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链,形成细胞外被(糖萼)。目前认为,细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。
2、凝集素是一类含糖(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质,即糖蛋白,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素能与细胞外被中的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的作用,从而凝集细胞。凝集素引起的细胞凝集,其细胞膜结构没有发生改变。与血液凝固中发生的复杂生化反应完全不同。
3、竞争性抑制实验:凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞凝集。
四、实验步骤
1、2%家兔红细胞悬液制备:以无菌方法抽取家兔耳缘静脉血液1ml(5ml注射器中先吸取3ml柠檬酸钠溶液),用0.9%的氯化钠溶液洗5次,3000r/s离心5min,最后按沉淀的红细胞体积用0.9%的氯化钠溶液配成2%的红细胞悬液。
2、土豆凝集素制备:称取去皮土豆块茎2g,切成薄片,加10mlPBS缓冲液,浸泡2h,浸出粗提液中含有可溶性土豆凝集素。
…… …… 余下全文