糖类的性质实验（一）糖类的颜色反应

　　一、目的

　　1．了解糖类某些颜色反应的原理。

　　2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。

　　二、颜色反应

　　（一）α-萘酚反应（Molisch反应）。

　　1．原理 糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。

　　2．器材

　　（1）试管及试管架（2）滴管

　　3．试剂

　　（1）莫氏（ Molisch）试剂： 5％ α-萘酚的酒精溶液1500mL称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体

　　积达100mL，贮于棕色瓶内。用前配制。

　　（2）1％葡萄糖溶液 100mL

　　（3）1％果糖溶液 100mL

　　（4）1％蔗糖溶液 100mL

　　（5）1％淀粉溶液 100mL

　　（6）0.1％糠醛溶液 100mL

　　（7）浓硫酸 500mL

　　4．操作

　　取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、

　　1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、 0.1％糠醛溶液各 1mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸约1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。浓硫酸在试液下形成两层。在二液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。

　　（二）间苯二酚反应（Seliwanoff反应）

　　1．原理

　　在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。

　　2．器材

　　（1）试管及试管架

　　（2）滴管

　　（3）水浴锅

　　3．试剂

　　（1）塞氏（Seliwanoff）试剂 0.05％间苯二酚-盐酸溶液

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高中生物学实验的各种颜色反应总结

1、斐林试剂（或班氏试剂）检测可溶性还原糖

原理：还原糖+斐林试剂（或班氏试剂）→砖红色沉淀

常见还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖

注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。

应用：检验和检测某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;在医学上进行疾病的诊断，如

糖尿病、肾炎。

2、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色;

苏丹Ⅳ+脂肪→红色

注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3、双缩脲试剂检测蛋白质

原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温(不需要加热)。 应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质;用于劣质奶粉的鉴定。

4、碘液检测淀粉

原理：淀粉+碘液→蓝色

注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉

5、DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色

应用：可以显示DNA在细胞中的分布。

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

条件：沸水浴

应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。

6、吡罗红使RNA呈现红色

原理：RNA+吡罗红→红色

应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是

单独染色。

7、台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进 入胞内;死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。 应用：区分活细胞和死细胞;检测细胞膜的完整性。

8、线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿 色，而细胞质接近无色。

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高中生物学实验的各种颜色反应总结

1、斐林试剂（或班氏试剂）检测可溶性还原糖

原理：还原糖+斐林试剂（或班氏试剂）→砖红色沉淀

常见还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖

注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。

应用：检验和检测某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;在医学上进行疾病的诊断，如

糖尿病、肾炎。

2、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色;

苏丹Ⅳ+脂肪→红色

注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3、双缩脲试剂检测蛋白质

原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温(不需要加热)。 应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质;用于劣质奶粉的鉴定。

4、碘液检测淀粉

原理：淀粉+碘液→蓝色

注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉

5、DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色

应用：可以显示DNA在细胞中的分布。

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

条件：沸水浴

应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。

6、吡罗红使RNA呈现红色

原理：RNA+吡罗红→红色

应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色。

8、线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿

色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

9、酒精的检测

原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。

应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式;制作果酒时检验是否产生了酒精;检查司机是否酒后 驾驶。

10、CO2的检测

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高中生物学实验的各种颜色反应总结 1斐林试剂检测可溶性还原糖

原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀

注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。

应用：检验和检测某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。

2苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色;苏丹Ⅳ+脂肪→红色

注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3双缩脲试剂检测蛋白质

原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温(不需要加热)。 应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质;用于劣质奶粉的鉴定。 4碘液检测淀粉

原理：淀粉+碘液→蓝色

注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉

5DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色

应用：可以显示DNA在细胞中的分布。

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。 6吡罗红使RNA呈现红色 原理：RNA+吡罗红→红色 应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色。

7台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内;死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。 应用：区分活细胞和死细胞;检测细胞膜的完整性。

8线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

9酒精的检测

原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。 应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式;制作果酒时检验是否产生了酒精;检查司机是否酒后驾驶。

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细菌的生理生化反应实验报告

【实验目的】 

了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。 

【实验原理】 

通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。 微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为V.P.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

 【实验材料和用具】

1.       菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2.       培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂

3.       仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。

【实验方法】

（一）V-P反应

1.试管标记 取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录 去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。

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实验三聚合酶链式反应（PCR）以及琼脂糖凝胶电泳

实验目的

1.掌握PCR反应的原理及各反应成分的作用；

2.熟悉PCR反应程序的设计规则；

3.掌握引物的设计原则及其与PCR其他成分的配制方法；

4.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及其应用范围；

5.熟悉琼脂糖凝胶电泳相关缓冲液的配制方法。

实验原理

一．聚合酶链式反应原理

在已知待扩增模板全部或部分序列的情况下，依据DNA半保留复制的机理，在含有Mg2+的缓冲溶液中，采用耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在特异性引物（分为上游和下游引物）的引导下，通过dNTP为原料，以cDNA或DNA等为模板，在人为控制DNA合成系统（PCR仪）温度调节下，通过变性（95℃）、退火（50-60℃ ）及延伸（ 72℃ ）等3个步骤的循环进行（30-35循环），在体外进行双链DNA变性为单链，单链DNA与特异性引物退火形成局部双链，进而在DNA聚合酶的作用下使引物沿相应模板延伸为特异性引物所限定范围的大量双链DNA的体外合成反应。

本质为体外DNA合成的酶反应。

二．琼脂糖凝胶电泳反应原理

    琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。在一定电场强度下偏碱性的缓冲液中（TAE pH8.0或TBE pH7.5-7.8），DNA分子带负电，其迁移速度取决于分子筛效应，在电荷效应与分子筛效应作用下，具有不同的相对分子量及构型的DNA片段泳动速度不同。DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。

    凝胶电泳不仅可分离不同分子量的DNA，也可以分离分子量相同，但构型不同的DNA分子。如质粒的三种构型的泳动速率不同：超螺旋闭合环状质粒最快，线型质粒其次，开环质粒最慢。

实验步骤

（一）PCR 加样术式 

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实验1  糖的呈色反应和还原糖的检验

一、实验目的

1.学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。

2.了解鉴定还原糖的方法及其原理。

二、实验原理

糖经浓无机酸处理，脱水产生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛。

这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。与一元

酚如α一萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。与多元酚如间苯二酚作用，则形成氧杂蒽有色物质，反应式如下：

通常使用的无机酸为硫酸。如用盐酸，则必须加热。常用的酚类为α一萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。

有人认为，用浓硫酸作为脱水剂时，形成有颜色的产物与酚核的磺化有关，见如下反应式；

（一）糖的呈色反应

 1．Molish反应(α～萘酚反应)

       本实验是鉴定糖类最常用的颜色反应。糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与α一萘酚作用，形成红紫色复合物。在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称紫环反应。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。

 2．蒽酮反应

    糖经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10一酮一9，10一二氢蒽)反应生成蓝一绿色复合物。

 3.  Seliwanoff反应(间苯二酚反应)

   　该反应是鉴定酮糖的特殊反应。在酸作用下，己酮糖脱水生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物，反应迅速，仅需20—30s。在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳性反应。蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反应。

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