大学生创新实验
实验报告(一)
在第一个月的大学生创新实验中,我主要是学习、熟悉基本操作,阅读课题相关文献。所学的基本操作有:仪器的洗涤、柱层析、减压蒸馏;阅读文献为:《N_取代马来酰亚胺巯基荧光探针的研究进展》
该文献为本实验课题综述,它评述了测定含—SH生物活性物质如肽、蛋白质等的N—取代马来酰亚胺荧光探针的种类、性能、原理、应用及其进展。
巯基( —SH) 是细胞中化学活性最高的基团。在蛋白质中, —SH 部分是与酶活性有关的最具有反应性的官能团, 能保护细胞不受缺氧、毒素、诱变、放射线及许多致癌物的侵害。所以鉴别和定量测定生物巯基化合物日益受到关注。
传统的检测方法如:硝普盐法、碘量法、电流分析法、分光光度法、比色法等灵敏度低, 不能适应有些生物样品中巯基化合物的测定。 因此,我们的实验最终目的即为合成一些高灵敏的分析检测试剂, 新型的荧光—SH 衍生试剂成为研究的焦点。
—SH 荧光探针具有灵敏度高、可以直接测定含—SH 化合物与试剂的反应速度等优点,具体的—SH荧光探针已报道的有三类:
芳基卤化物、丹磺酰氮丙啶类:好的选择性和灵敏度,对—SH 的检测限一般可达10-12mol,但自身都有较强的荧光, 衍生产物必须经
过分离才能进行检测, 一般用于HPLC 柱前衍生。
苯并呋喃磺酰卤:其自身荧光较弱, 一般需在碱性条件及高于室温下与—SH 衍生。
乙酰卤衍生物:主要是碘乙酰胺衍生物和马来酰亚胺衍生物,最常用来衍生—SH, 它们与—SH 反应快, 在室温及生理pH 下即可进行, 但前者与—SH 的加成产物在水解时易失去荧光团, 且其自身对光不稳定,而马来酰亚胺类荧光探针与—SH的加成产物比较稳定, 它自身荧光很弱, 在与—SH 加成后荧光增强, 这种仅在反应中荧光增强的特性使其表现出独有的优越性。
因此我们的研究重点在N—取代马来酰亚胺类巯基荧光探针( 简称N—MTFP)。
…… …… 余下全文