生物技术大实验

试验课教案

授课人：陈启龙

授课班级：20##级生物技术（本科） 

   授课时间：20##－20##学年度第二学期

生物技术大实验实验课总体安排

课程名称：生物技术大实验

面向专业：生物技术（本科）

应开实验时数：48

实验类别：基础

设置情况：独立设课

开课时间：第三学年第二学期

考核方式：口试与操作

实验目的与要求：

通过实验教学，训练学生掌握研究生物技术的最基本操作技能，加深理解生物技术的基本理论，同时培养学生观察、分析、解决问题的能力。

试验一 感受态细胞的制备

一 试验目的：理解并掌握感受态细胞制备的技术

二 试验原理：利用预冷的CaCl2液改变DH5a菌的细胞的通透性，便于质粒的转化。

三 主要仪器、试剂：

  分光光度计；恒温振荡培养箱；冷冻离心机；

  酵母粉；NaCl；胰蛋白胨；CaCl2；DH5a菌；

四  试验步骤：

 1.LB培养基的配制：

酵母粉2.5g、NaCl5.0g、胰蛋白胨5.0g 定容至500ml，pH值7.0

2.将LB培养基分装：

  5ml―――离心管

 100ml――250ml的锥形瓶中（扩大培养用）

100ml――250ml的锥形瓶中加琼脂1.7g制平板用

其余于500ml锥形瓶中保存备用

3.配制0.05M CaCl2,并将以上培养基等灭菌

4.接种DH5a菌于37℃倒置培养10-12小时

5.挑单菌落于5ml离心管中37℃振荡培养12小时

6.扩大培养单菌落，在2小时后开始测OD值，其值在0.3-0.4之间为宜。

7.制备感受态细胞

1）将对数期菌液倒入5mlEP管，配平，冰浴10分钟，4℃离心（4000r，10分钟）

2）去上清，加预冷的CaCl2 1ml重悬细胞，用枪打散转入1.5mlEP管中

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生命学院09级分子生物学实验报告

目录：

实验一 质粒 DNA 的小量制备（P2-P4）

实验二 DNA 的含量、纯度与分子量的电泳法测定（P4-P7）

实验三 感受态细胞的制备及转化（P7-P9）

实验一  质粒DNA的小量制备

一、实验目的

1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。

2．了解制备原理及各种试剂的作用。

3. 制取质粒以备大肠杆菌的培养和电泳。

二、实验材料及试剂

材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。

试剂：

1.   LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。如固体培养基则添加15g/L琼脂。

2.   溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。灭菌后存放。

3.   溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(内含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存。

4.   溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。

5.   酚/氯仿液(V/v＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放，并在上面覆盖等体积的0.01 mol/LTris-HCl(pH7.6)，4℃保存。

6.   无水乙醇

7.   70％乙醇

8.   pH8.0 TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。

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           山东大学细胞生物学实验报告      

姓名：高超     年级：20##级生科三班          学号:201300140020                 实验名称：苏丹Ⅲ染色观察小鼠脂肪    同组者：樊晓航，王昊明，余敬洋一，实验目的：

    1，了解小鼠膜的剪取方法，以及小鼠的内部结构。

    2，掌握并了解苏丹三染色的原理及方法。

    3，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理。

二，实验原理：

    脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。

    在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘。

    脂类染色最常用的染料是苏丹系列染料，本实验即使用苏丹Ⅲ为脂肪显色。苏丹Ⅲ是一种橙红色偶氮染料，由于其在脂肪中的溶解度高于在乙醇中的溶解度，当用70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液浸染脂肪细胞时，苏丹Ⅲ会从70%乙醇中脱离，溶解并集中在脂肪液滴中，使脂肪细胞着色（橘黄色）。以70%乙醇作为苏丹Ⅲ的溶剂可以减少乙醇对脂肪细胞中脂肪液滴的溶解，染色较大的脂肪块。染色的主要过程不涉及化学变化。

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用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉

一、  特异性目的片段DNA的扩增

实验原理：

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异 DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的 PCR 由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的 DNA 得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA 置高温下（通常为 93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的 DNA 聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的 3’端开始掺入，以目的基因为模板从 5’→3’方向延伸，合成 DNA 的新互补链。

本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定 3 中不同物种来源的肌肉。以不同物种来源的动物 DNA 为模板，用物种特异性的引物进行 PCR 扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现，其他条件下都不会出现特异性的条带。应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定 DNA 成分。

实验步骤：

1．不同反应体系的配制 按以下体积将各成分分别加入一做好标记的无菌 PCR 管中，配制 50μl PCR 反应体系，注意酶要最后加，加完后将 PCR 管放置在冰上。

2．设定好 PCR 仪的反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置 PCR 仪上，盖紧热盖，执行扩增程序。

反应程序为：

预变性 94℃  5min

变性 94℃  5s

退火 50℃  5s          循环 30 次

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实验报告

课程名称：   生物化学实验（甲）       指导老师：                 成绩：__________________

实验名称：                                                       实验类型：              

同组学生姓名：                        

一、实验目的和要求（必填）                         二、实验内容和原理（必填）

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实验报告

实验课程：             生物信息学              

学    号：                                     

姓    名：                                     

专业班级：                                    

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分 子 生 物 学

实验报告

20##级生物科学师范

 组长：

 组员：

        从甘薯中克隆ADK基因的核心片段

（西南大学生命科学学院，重庆400715）

摘要：甘薯为我国农业主要栽培作物，并且是分子生物学实验室常见材料，本次实验主要以甘薯叶片（部分为茎）为实验材料，第一次实验从材料中提取RNA并反转录cDNA第一链，经PCR扩增得到大量ADK基因核心片段，电泳检测胶回收ADK基因核心片段，将其与T载体相连并导入大肠杆菌DH5a感受态细胞中，扩增之后在加有相应抗生素的LB平板上筛选阳性克隆，这对后续生物信息学分析等有重要意义。第二次实验是用CTAB法提取甘薯DNA，PCR扩增再凝胶电泳检测纯度。（提取DNA也能扩增出ADK基因核心片段）

关键词：甘薯、PCR技术、腺苷酸激酶片段（ADK）、基因克隆、转化

Abstract: Sweet potato for my agricultural main cultivation crop, and is molecular biology laboratory common material, this times experiment main to sweet potato leaves (part for stems) for experiment material, first times experiment from material in the extraction RNA and reverse recorded cDNA first chain, by PCR spread increased get large ADK gene core fragments, electrophoresis detection rubber recycling ADK gene core fragments, will its and t carrier connected and import Escherichia coli DH5 (feel State cell in the, spread increased  in  plus has corresponding antibiotics of LB Tablet Shang filter positive clone This importance to subsequent bioinformatics analysis. The second experiment was extracted by CTAB method DNA,PCR amplification and gel electrophoresis and purity of sweet potato. (Extraction of core fragment of DNA can be amplified ADK gene)

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