红细胞渗透脆性试验

[目的和原理]  目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。

将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。

[实验对象]  家兔

[实验器材]  试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。

[实验步骤]

（一）低渗盐溶液的配制

取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。

（二）枸椽酸钠血的制备

家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。

[观察项目]

用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。

1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。

2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。

3、试管内溶液呈现透明红色，说明红细胞全部溶解，称为完全溶血，首先引起红细胞全部溶解的低渗盐溶液浓度，即红细胞的最大抵抗力（最小脆性）。

…… …… 余下全文

                        红细胞渗透脆性实验

一.原理：

本实验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系，表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）.球形细胞表面积/体积比值减少,脆性显著增加.

二.试剂:

171mmol/LNaCl溶液(10g/L):

取经100度烘干的分析纯氯化钠1.000g置100ml容量瓶中,加少量双蒸溜水溶解后,再加双蒸溜水至刻度

三.操作:

   1.分别取10g/LNaCl液和蒸溜水,按表加入小试管中

2.将试管架带至病人面前,用配备6号针头的干燥灭菌注射器取静脉血1~1.5ml,立即滴于各管中,每管1滴(贫血病人可加2滴),轻轻摇匀,室温静置.

3.每次试验均应同时作正常对照.

结果判断

静置室温2小时,观察结果,从高浓度管开始观察,上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管;溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.

…… …… 余下全文

「参考值」 开始溶血：0.42%～0.46%氯化钠溶液 完全溶血：0.28%～0.32%氯化钠溶液 「临床意义」 红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜可使红细胞逐渐胀大而破坏。本试验是测定红细胞对各种浓度的低渗溶液的抵抗力。红细胞对低渗溶液抵抗力与其厚度有关，厚度越大，膜面积与体积比值越小，则渗透脆性越大。 1.红细胞脆性增加遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。 2.红细胞脆性减低见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型β海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等。

…… …… 余下全文

「参考值」 通常2%～5%但正常值随转动速度，玻璃珠的性状等多积因素而改变，故每个试验室应建立自己的正常值。 「临床意义」 遗传性球形红细胞增多症机械脆性显著增高，渗透脆性正常或减低的疾病如海洋性贫血，镰状红细胞等机械脆性也可增高。

…… …… 余下全文

二、 影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？

红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等

实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等

【课前讲解】

一、 实验设计的原理

将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。

生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl溶液既是等渗溶液又是等张溶液。

成败关键（注意事项）

1. 血液最好新鲜制备。

2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。

3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。

4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。

…… …… 余下全文

1、 【预期用途】

适用于体外检测贫血等引起的红细胞渗透脆性病变，特别是红细胞渗透脆性降低一类的贫血症筛查。（如地贫症、严重缺铁性贫血症）

2、 【检验原理】

贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血。

3、 【主要组成成分】

组成

由A母液（红细胞渗透脆性检测液）；B母液（终止红细胞溶血液）；C母液（红细胞溶血液）组成；

成分

A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；B母液采用氯化钠制成；C母液采用皂素（saponin）制成。

4、 【贮存条件及有效期】

避光贮存在2℃~8℃环境中，其保质期12个月。

A和B试验液可在室温保存，C试验液在2℃~8℃保存；试剂开瓶后有效期为3个月。

5、 【适用仪器】

具有530波长的分光光度计；普通离心机；水浴箱。

6、【样品要求】

新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。

7、 【检测方法】

【试验液配制】

1、 A试验液：

用一个100ml容量瓶（不要用量筒！），上放一个小漏斗。将A母液倒入漏斗中。用纯化水洗净装A母液的管和盖，将管内余液倒入100ml容量瓶，然后加纯化水于100ml容量瓶中，准确至100ml刻度，混匀后即为A试验液。

2、 B试验液：

将B母液倒入100ml容量瓶中，加入纯化水100ml，混匀后，即为B试验液。

3、 C试验液：

将C母液倒入100ml容量瓶中，加入纯化水60ml，混匀后，即为C试验液。

【实验操作】

1、 取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。

2、 加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分钟。

…… …… 余下全文

红细胞膜通透性实验及分析

乔艳红 路路

（东北师范大学生命科学学院10级）

摘要：红细胞对不同的物质有不同的通透性，文章以人的红细胞和鸡的红细胞通透性实验为基础，研究、分析和验证了不同红细胞对同一种或不同种物质的通透性，总结出了哺乳动物的红细胞是研究细胞膜通透性的良好材料以及物质进入红细胞的一般规律。

关键词：红细胞 通透性 实验分析 细胞膜

Result Analysis of the Experiment of Red Blood Cell Membrane Permeability

Abstract  The red blood cells to different material have different permeability, the article to the red blood cells and chicken of red blood cells permeability experiment as the foundation, study analyzed and verified the different red blood cells to the same or different kinds of material permeability, and sums up the mammals red blood cells research cell membrane permeability good materials and material into the general rules of the red blood cells.

Keyword  red cell permeability  experimental analysis cell membrane

1 前 言

  细胞膜的存在将胞内物质与细胞周围环境隔离开，为细胞内发生各种代谢反应提供了一个相对稳定的内环境。但屏蔽是相对的，因为细胞要与周围环境间进行物质和能量的交换，因此，细胞膜也是细胞与外界环境进行物质交换的结构。细胞膜可以选择性的让某些物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式不同，大体可分为3种途径：被动运输（依浓度梯度，不需要能量）、主动运输（逆浓度梯度或电化学梯度，需要能量）和胞吞与胞吐作用[1]。

…… …… 余下全文