荧光素酶报告基因 原理：转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

其原理简述如下：

（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。

（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

步骤：

1、 (1) 铺细胞于 24 孔板中，{选用48孔板（如果比较难做的系统可以选用24孔板甚至12孔板，细胞量越多表达的酶相应越多），铺板密度约为30%（如果比较着急做实验，密度可以提高）。}每孔细胞数为 20 万细胞左右，待细胞融汇度达到70% （适合磷酸钙转染）、 85% （适合脂质体转染）时进行转染。一般选用细胞密度为50-70%时进行转染（因为转染后要让质粒表达一定的时间，一般是18-24小时，故而这个细胞密度到加药时密度会差不多到100%）。转染体系的配置：目标蛋白的质粒（pBind-），luc质粒，fermentas转染试剂，（质粒：转染试剂=1：1-3（μg：μL）这个比例根据细胞、质粒转染难易程度而定，必要时需要自己摸条件）。——此步骤与与普通的细胞转染实验的要求相同。

脂质体法

（1）在细胞密度达到80%左右，于转染前1小时用基本培养基（常用无血清培养

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                       上海市同济医院

                    用药相关基因测定报告及分析

姓名：王立平       性别：男           年龄：36        科室：肿瘤科

病区：同四          床位：18          住院号：515852

诊断：结肠肝曲中分化腺癌（pT3N1M0）术后

基因检测结果：

个体化给药方案推荐：

伊立替康是喜树碱半合成衍生物，其主要代谢部位在肝脏，经静脉注射后在体内转化为SN-38，抑制拓扑异构酶I，发挥细胞毒作用。SN-38在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）作用下灭活后代谢。因此UGT1A1功能及其基因多态性与伊立替康有密切关系。研究表明UGT1A1 *6突变型的患者发生3/4级血液学毒性及中性粒细胞减少的概率增高。UGT1A1 *28突变型的患者发生3/4级血小板减少和腹泻的发生率明显增加。该患者UGT1A1 *28 [TA]6/[TA]7杂合子突变，UGT1A1 *6未突变，发生3/4级血小板减少和腹泻的概率增高，因此在用药后应如出现腹泻应及时予洛哌丁胺（首次服药4mg，后每2小时服药2mg，直至最后一次稀便结束后12h）。注意监测血常规，如出现3/4级血小板减少应及时予以TPO、IL-2等药物。

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第六章 报告基因检测系统

公司现已发展的有三种报告基因检测系统:NF-Kb,p53,NFAT.根据待检基因对其作用的原理,及在药物,抗体等作用下,产生的不同效果,这三种报告基因系统又具体可以分为:NF-kB 刺激系统和NF-kB 抑制系统;p53刺激系统和p53抑制系统;NFAT刺激系统和NFAT抑制系统.

1. NF-kB 报告基因检测系统

(NF-kB 刺激系统;NF-kB 抑制系统)

1.1细胞培养

1)细胞株及材料

细胞株: 293-T细胞

培养基: DMEM(10%FBS GBICO),DMEM(无血清)

培养器皿:T75(75cm2)培养瓶(以下相同),24孔细胞培养板

2)细胞培养及铺板

a) 传代:用DMEM(10%FBS) 培养基接种293T至75 cm2培养瓶,细胞长满后铺板并传代.

注:一般一瓶细胞总数可以达到3×107个,可以按1:8分瓶.

b) 铺板:

细胞消化:将培养好的293 T细胞,倾去培养基,加入1-2ml1×胰酶轻轻摇晃以覆盖整瓶细胞,37℃培养箱放置2-3min,观察细胞从瓶壁上脱落下来(也可以用手拍击瓶壁),显微镜下观测到细胞成单个,或是只有2-3个细胞聚团,即可以加入含有血清的DMEM(10%FBS) 10ml左右,终止胰酶的消化作用,随后从中取少量细胞计数.

细胞计数:如果细胞密度较大,可按一定倍数稀释后计数,细胞密度的计算按照公式:

细胞密度(单位:个/ml)=(4个大方格的细胞总数/4)×104×稀释倍数

铺板: 24孔板按照每孔1.0105(NF-kB 刺激系统)或0.8105(NF-kB 抑制系统),接种体积为500L来铺板.

细胞加入后将24孔板沿水平面桌面的方向前后左右来回晃动(勿转动),使细胞能够均匀分布,放置细胞培养箱生长.

1. 2 转染

1)试剂及材料:

转染试剂:Lipofectamin 2000

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报告基因检测技术 报告基因的种类很多，根据对其表达产物的分析检测方法的不同，可将其分为体外报告基因和体内报告基因。前者的分析需要在含有报告分子的细胞裂解液或细胞、组织培养液（分泌型报告基因）中进行报告分子的定量。较典型的有氯霉素乙酰基转移酶基因（CAT）、人生长激素基因（hGH）及分泌型碱性磷酸酶基因（SEAP）等。后者的分析可以在活的细胞或组织中，或在已经组化固定的组织或细胞中进行。较典型的如绿色荧光蛋白基因（GFP）。而β-半乳糖苷酶基因（β-Gal）和萤火虫荧光素酶基因既可以在体外分析也可以在体内分析。

具体的细胞转染及所需的后续步骤因细胞种类及转染方法等各不相同。

我们实验室比较擅长的是基于报告基因检测的药物筛选方法，具体来说就是利用荧光素酶这一报告基因建立的多种药筛模型。

各种报告基因的比较

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什么是行业研究报告

行业研究是通过深入研究某一行业发展动态、规模结构、竞争格局以及综合经济信息等，为企业自身发展或行业投资者等相关客户提供重要的参考依据。

企业通常通过自身的营销网络了解到所在行业的微观市场，但微观市场中的假象经常误导管理者对行业发展全局的判断和把握。一个全面竞争的时代，不但要了解自己现状，还要了解对手动向，更需要将整个行业系统的运行规律了然于胸。

行业研究报告的构成

一般来说，行业研究报告的核心内容包括以下五方面：

行业研究的目的及主要任务

行业研究是进行资源整合的前提和基础。

对企业而言，发展战略的制定通常由三部分构成：外部的行业研究、内部的企业资源评估以及基于两者之上的战略制定和设计。

行业与企业之间的关系是面和点的关系，行业的规模和发展趋势决定了企业的成长空间；企业的发展永远必须遵循行业的经营特征和规律。

行业研究的主要任务：

解释行业本身所处的发展阶段及其在国民经济中的地位

分析影响行业的各种因素以及判断对行业影响的力度

预测并引导行业的未来发展趋势

判断行业投资价值

揭示行业投资风险

为投资者提供依据

2014-20xx年中国基因检测市场调研及投资战略报告

【出版日期】20xx年

【交付方式】Email电子版/特快专递

【价 格】纸介版：7000元 电子版：7200元 纸介+电子：7500元

【报告编号】R243043

【报告链接】/research/201405/243043.html

日前，国家食品药品监督管理总局、国家卫生和计划生育委员会联合发出通知，要求在相关的准入标准、管理规范出台以前，任何医疗机构不得开展基因测序临床应用，已经开展的，要立即停止。

两部委的联合通知指出，包括产前基因检测在内的基因测序相关产品和技术属于当代前沿技术研究范畴，涉及伦理、隐私和人类遗传资源保护、生物安全以及医疗机构开展基因诊断服务技术管理、价格、质量监管等问题。目前，基因测序相关产品和技术已由实验室研究演变到临床使用，对此，国务院有关部门高度重视。为保证公众使用基因测序诊断产品的安全、有效，国家食药总局和国家卫生计生委正在组织相关领域专家调查论证。

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基因检测项目可行性报告

国统调查报告网（即中金企信国际咨询公司）拥有10余年项目可行性报告撰写经验，拥有一批高素质编写团队，卓立打造一流的可行性研究报告服务平台为各界提供专业可行的报告（注：可出具各类项目的甲级资质）。

项目可行性报告用途（企业投融资、国家发改委立项、银行贷款申请、申请进口设备免税、境外投资项目核准、政府资金项目申报）

可行性研究报告是确定建设项目前具有决定性意义的工作，是在投资决策之前，对拟建项目进行全面技术经济分析论证的科学方法，在投资管理中，可行性研究是指对拟建项目有关的自然、社会、经济、技术等进行调研、分析比较以及预测建成后的社会经济效益。

由于可行性研究报告属于订制报告，以下报告目录仅供参考，成稿目录可能根据客户需求和行业分类有所变化。

第一章 基因检测项目总论

第一节 基因检测项目背景

一、基因检测项目名称

二、基因检测项目承办单位

三、基因检测项目主管部门

四、可行性研究工作的编制单位

五、研究工作概况

第二节 编制依据与原则

一、编制依据

二、编制原则

第三节  研究范围

一、建设内容与规模

二、基因检测项目建设地点

三、基因检测项目性质

四、建设总投资及资金筹措

五、投资计划与还款计划

六、基因检测项目建设进度

七、基因检测项目财务和经济评论

八、基因检测项目综合评价结论

第四节 主要技术经济指标表

第五节 结论及建议

一、专家意见与结论

二、专家建议

第二章 基因检测项目背景和发展概况

第一节 基因检测项目提出的背景

一、国家或行业发展规划

二、基因检测项目发起人和发起缘由

第二节基因检测项目发展概况

一、已进行的调查研究基因检测项目及其成果

二、试验试制工作情况

三、厂址初勘和初步测量工作情况

四、基因检测项目建议书的编制、提出及审批过程

第三节 投资的必要性

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无创基因检测报告领取单

姓名：_____________________________ 条码：__________________________________

您好，检测结果一般在12个工作日出具（检测结果未见异常会短信通知，结果异常会电话通知），3周后持此单到医院抽血室领取报告和#5@p。报告需邮件孕妇，邮费到付，收件人需是本人名字。

报告领取时间：

（其它时间无人接待，请勿前来，谢谢配合！）

无创基因检测报告领取单

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您好，检测结果一般在12个工作日出具（检测结果未见异常会短信通知，结果异常会电话通知），3周后持此单到医院抽血室领取报告和#5@p。报告需邮件孕妇，邮费到付，收件人需是本人名字。

报告领取时间：

（其它时间无人接待，请勿前来，谢谢配合！）

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