篇一 :生化实验报告

生化实验报告

单位:

学号:

姓名:

实验1.多酚氧化酶(PPO)的分离提取

一、实验原理与目的

植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成为醌,使组织形

成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。但是PPO的存在是水果、蔬菜褐变的主要原因之一,影响一些经济植物产品的质量。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。

本实验将采用马铃薯为主要材料,通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、实验材料与试剂

1.材料:马铃薯(大约每小组100-200g)

2.试剂:0.03M磷酸缓冲液pH6.(内含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,5%甘油,1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml; 固体硫酸铵;0.03M磷酸缓冲液pH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,0.005M MgCl2)配制时配×10倍浓缩液100ml;0.02M Tris-HCl缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)配制时配×10倍浓缩液1000ml; NaCl; 聚乙二醇: DEAE-纤维素 DE52; 葡聚糖凝胶Sephadex G-200:

三、 实验步骤

(1)粗酶提取: 马铃薯丁按1:1(W/V)比例与0.03M磷酸缓冲液pH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,5%甘油,1%的聚乙烯吡咯烷酮)混合,匀浆后4层纱布过滤,滤液以6000rpm离心10min,弃除沉淀获得酶提取液。

(2)盐析分级沉淀:在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),然后6000rpm离心20min弃除沉淀;离心上清液再加入固体硫酸铵达到70%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),再以6000rpm离心20min,弃除上清液,收集粗酶沉淀;沉淀用0.03M磷酸缓冲液pH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,0.005M MgCl2)溶解,装入透析袋中用0.02M KCl溶液透析至无硫酸铵根离子,获得粗酶液供上柱使用。

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篇二 :生物化学实验报告

20##年生物化学实验B

实验报告

    名: XXXX            

    号: XXXXXX         

实验时间: 20##年11月17日 

实验分组: 7            

组内成员: XXXXXXXXXXX  

                      XXXXXXXXXXX  

任课教师:  XXXX           

摘要

本实验通过从小牛肠中通过刮去,离心,析出等方式提取小牛肠碱性磷酸酶,再通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量,利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量及测定酶的活性。

1.实验部分

1.1试剂与仪器

1.试剂:

(1)正丁醇、丙酮。

(2)1 mol/L 醋酸,1 mol/L NaOH,硫酸铵。

(3)平衡缓冲液:0.01 mol/L Tris-HCl,pH 8.0。

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篇三 :生化实验报告4

生物化学实验报告

          纤维素酶活力的测定

    还原糖的测定--3,5-二硝基水杨酸法

                                刘欣怡 201100140057

                                   20##级生物基地班

                               周一下午 同组者:刘艺

                             20##年4月8号 周一下午

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篇四 :生物化学实验报告

实验一 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的含量(p24)

一、目的要求 

掌握考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质含量原理和方法。

二、实验原理

    考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质─染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色。在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰(lmax)的位置,由465nm变为595nm。且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。

考马斯亮蓝染色法的突出优点是:

(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。

(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。

(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

此法的缺点是:

(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。

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篇五 :生化大实验报告

                                    


实验一多酚氧化酶(PPO)的分离与提取

一、实验目的

1、本实验以马铃薯为主要的实验材料,通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。

2、通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、实验原理

多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,位于质体、微体内,参与植物抗体的调节,属于末端氧化酶的一种。在植物体受到机械损伤和病毒感染后,PPO催化酚与氧氧化成醌,使组织形成褐变,对PPO弄得的测定便是通过PPO氧化酚产生醌的变色反应测定其酶活性。

在蛋白质水溶液中,加入少量的中性盐,如硫酸铵、氯化钠等,会增加蛋白质分子表面的电荷,增强蛋白质分子与水分子的作用,从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。这种现象称为盐溶;而在蛋白质水溶液中继续加入无机盐类可以其溶解度降低而析出的过程,该现象称为盐析。蛋白本身随盐浓度的溶解度变化曲线具有特征性,可以依据此分离蛋白,硫酸铵分级便依据此原理,首先在蛋白质溶解度最高时,离心取上清,去除此时未溶解或已经沉淀的杂蛋白,之后再其溶解度最低且未变性的时候离心取沉淀复溶,去除尚未析出的杂蛋白,从而达到纯化目的蛋白的目的。多酚氧化酶在40%硫酸铵溶液中溶解度最高,而在75%硫酸铵溶液中沉淀量最高,由此可分离提取多酚氧化酶。但使用硫酸铵分级,分离后的产物中会有铵根离子残留,如果采用凯氏定氮法测定蛋白质浓度时,残留的铵根离子会造成测定时高于实际值,同时该样品之后会用于离子交换层析纯化,所以需要去除其中的离子,故需要透析去除其中铵根离子。

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篇六 :生化实验报告-黎骅

生物化学实验报告

姓名:黎骅 

日期:2010.9-10

生物化学实验报告

实验一:蔗糖酶的提取

一、实验基本原理

1、酵母细胞破碎:本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法(研磨)将酵母细胞破碎,把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。

2、蔗糖酶的初步分离纯化:蛋白酶常用的初步分离纯化方法有:盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。本实验采用选择性变性(加热)、有机溶剂(乙醇)沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯。

(由于酶蛋白在分离纯化过程中易变性失活,为了能获得尽可能高的产率和纯度,在提纯操作中要始终保持酶的活性,如在低温下操作等,这样才能收到较好地分离提纯效果。)

二、实验材料与试剂

1、实验材料:市售干酵母粉 10g/组(3~4人)

2、实验试剂:⑴ 石英砂,⑵ 95% 乙醇(-20℃),⑶ 20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。

三、实验器材与仪器

1、电子天平(称量样品);2、研砵(每组一套);3、50ml高速离心管(4支/组、4孔50ml离心管架一个/组);4、托盘天平(离心管平衡用);5、高速冷冻离心机;6、恒温水浴箱(50℃);7、制冰机;8、1.5ml离心管(留样品Ⅰ、Ⅱ用)及离心管架 ;9、7ml离心管(留样品Ⅲ用)及离心管架 ;10、-20℃冰箱。

四、实验操作方法和步骤

   分组操作:本组2人。

1、酵母细胞破碎

  可采用两种方法之一:干磨法和湿磨法。

  本实验采用干磨法:

     称取市售干酵母粉10g,约3g石英砂放入研钵中直接研磨至尽可能成细粉末状(约15分钟),量取总体积50ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲     液,分2次加在研砵内研磨10分钟,使呈糊状液体;将糊状液体转移到2支50ml离心管中,两支离心管平衡后,4℃、12000r/min离心15分钟,收集上清液并量出体积V1(样品I)另留1ml上清液(样品I ),用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析。

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篇七 :生化实验报告

果蔬营养含量的测定

学院:农学院

专业:植物保护

班级:植保1001

姓名:XXX

学号:XXXXXXX

同组人:XXX


摘要: 

果蔬中含有大量的营养物质,如蛋白质,还原糖,维生素C含量等等,通过对其进行营养测定,可以了解到这些营养物质的含量。

3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法是还原糖测定的一种常用方法。该方法具有简便、快速、灵敏度高等特点。

秦永惠等[1]采用 2 ,6-D二氯靛酚钠动力学分光光度法测定了西红柿及草莓中的抗坏血酸 ,提出用 2 ,6-D二氯靛酚钠作氧化剂 ,与抗坏血酸混合 ,在固定时间间隔于 611 nm 处测得吸光度 A 值的变化(ΔA/Δt)与维生素 C含量成线性关系. 线性范围为 0 mg/L12 mg/L ,在样品处理时采用偏磷酸作为提取剂 ,以减缓 Vc 被氧化的速度. 该法灵敏度高 ,操作简便 ,试剂易得 ,容易推广。

本文介绍了用这几种方法分别对青椒、马铃薯的维生素C、还原糖以及淀粉酶活力进行了实验,得出了相关数据。

关键词:

淀粉酶活力   还原糖   维生素C

原理:

淀粉酶的活力大小和产生的还原糖的量成正比。用比色法测定还原糖(麦芽糖)的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。由于两种淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化,β-淀粉酶不耐热,在70℃15min钝化。根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力。淀粉酶水解淀粉产物遇碘呈现不同的颜色、温度、pH或激活剂,抑制剂对淀粉酶活性影响程度不同,故可由酶反应产物遇碘呈现的颜色判断上述诸因素对酶活性影响。在温度低和较高时,淀粉酶活性丧失,而在40℃左右酶活性很高。过酸或过碱环境使酶失活,在pH5.6(接近中性)淀粉酶活性较高。酶抑制剂使酶活性降低甚至丧失,酶激活剂使酶活性升高。

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篇八 :生化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告

实验二:酶活力测定方法的研究

一.研究背景及目的

           酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白,几乎所有的生化反应都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。本实验选取萌发的禾谷类种子为材料,通过对其所含两种淀粉酶活力的测定来研究酶活力测定的方法。

二.           实验原理

    萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α淀粉酶和β淀粉酶,β淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α淀粉酶不耐酸,在pH3.6下则发生钝化[1]。本实验的设计利用β淀粉酶不耐热的特性,在高温下(70℃)下处理使得β淀粉酶钝化而测定α淀粉酶的酶活性[1]。酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,麦芽糖的浓度利用比色法可以很容易测得。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性,拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性,再做进一步分析。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。

三.           材料、试剂与仪器

材料:

萌发的小麦种子

试剂:

① 1%淀粉溶液(称取1克可溶性淀粉,加入80ml蒸馏水,加热熔解,冷却后定容至100ml);

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